Biologia molecular



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BIOLOGIA MOLECULAR - 2o. SEMESTRE 2005
1)- Em relação as Técnicas de DNA recombinante, responda:

  1. O que são Enzimas de Restrição e como elas podem ser utilizadas para a criação de moléculas de DNA Recombinante?

  2. O que são plasmídeos e como eles podem ser utilizados para a criação de moléculas de DNA Recombinante?

  3. Cite uma estratégias que voce pode utilizar para aumentar a eficiência de clonagem de um fragmento em um vetor.

  4. Cite uma estratégia que voce pode utilizar para identificar visualmente colônias de bactérias contendo um inserto clonado num plasmídeo.

2)- Imagine que voce esteja interessado em estudar o genoma de um fungo patogênico. Descreva em linhas gerais os procedimentos necessários para a produção de:



  1. uma biblioteca genômica deste fungo em bactérias.

  2. uma biblioteca de cDNA deste fungo em bactérias

  3. Se você quizer obter uma proteína desse fungo expressa em bactéria e sabendo que essa proteína é mais expressa na forma micelial do fungo, qual tipo de biblioteca que voce iria utilizar p/ obter a sequencia clonada?

3)- Descreva em linhas gerais o método de Sanger para sequenciamento de DNA. Indique como é a reação que deve ser feita e o tipo de eletroforese voce deverá utilizar para obter a sequência de bases de um fragmento de DNA supondo que você NÃO possua um sequenciador automático.


4)- Descreva em linhas gerais a técnica de amplificação de fragmentos de DNA pela reação em cadeia da polimerase (PCR). Baseado na resposta acima, faça uma lista de todos os componentes que voce deve adicionar a um tubo de ensaio contendo o DNA purificado de uma célula de maneira que voce possa amplificar um gene específico dessa célula.
5) Considere que bactérias nem sempre utilizam todos os possíveis códons para um dado aminoácido e, portanto, um códon raro pode funcionar como um stop códon. O que isso tem de implicação em biotecnologia?
6) Considere que o sinal de início de tradução em bactéria é diferente que em célula de mamífero, em que isso pode afetar a vacinação com DNA?
7) Como vc desvendaria as mudanças no proteoma do cérebro de um camundongo sob efeito de stress (diários aprisionamentos em tubos de centrífuga por 2 horas)



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