Autor do trabalho: deivys leandro portuondo fuentes



Baixar 17,75 Kb.
Encontro08.02.2019
Tamanho17,75 Kb.

PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM

BIOCIÊNCIAS E BIOTECNOLOGIA APLICADAS À FARMÁCIA
AUTOR DO TRABALHO: DEIVYS LEANDRO PORTUONDO FUENTES
TÍTULO DO TRABALHO: Desenvolvimento e avaliação de candidatos vacinais à base de proteínas da superfície celular de Sporothrix schenckii
CURSO: DOUTORADO

DATA DA DEFESA: 03/07/2015

ORIENTADOR: IRACILDA ZEPPONE CARLOS

CO-ORIENTADOR: ALEXANDER BATISTA DUHARTE

ÁREA DE CONHECIMENTO: IMUNOLOGIA

RESUMO:

A esporotricose é uma infecção subaguda ou crônica que afeta seres humanos e outros mamíferos, causada pelo complexo de espécies Sporothrix schenckii. A doença tem uma distribuição mundial, mas é endêmica no Brasil, principalmente no estado do Rio de Janeiro, onde o gato tem se tornado o principal agente transmissor. O tratamento antifúngico convencional é demorado e está associado a efeitos adversos, apontando a necessidade de terapias mais eficazes e seguras, sendo a vacinação profilática ou terapêutica provavelmente a alternativa mais promissora. Neste estudo foi avaliada a imunogenicidade e a toxicidade de candidatos vacinais à base de proteínas da superfície celular (PSCs) de S. schenckii stricto sensu. As PSCs isoladas com o agente redutor Ditiotreitol foram caracterizadas por eletroforese,espectrometria de massas e pelo programa preditor de adesinas FungalRV. As PCSs foram formuladas com dois adjuvantes, hidróxido de alumínio (HA) ou Gel PetA, em duas concentrações ou usadas isoladamente. As formulações resultantes (PSC10, PSC100,HA+PSC10, HA+PSC100, PetA+PSC10 ePetA+PSC100) foram administradas em duas doses pela via subcutânea em camundongos Balb/Ccom intervalo de 2 semanas. O soro obtido de cada grupo sete dias após a segunda dose foi usado para analisar a imunogenicidade de cada formulação. O soro de todos os grupos vacinados, exceto os grupos PSC10 eHA+PSC10,reagiram com uma banda de 47kDa, previamente identificada como a enzima glicolític enolaseepredita como uma adesina pela base dados FungalRV. Posteriormente foi demonstrada por citometria de fluxo a presença dessa proteína na parede celular de S. schenckii, sugerindo o papel imunogênico da mesma. A indução das imunoglobulinas IgG eIgG2afoi significativamente maior com HA+PSC100 e Pet+PSC100 em relação a PSC10, PSC100, HA+PSC10e PetA+PSC10. A indução significativa dos subtipos IgG1 eIgG2aedas citocinas IL-12, IFN-γ, IL-4 eIL-17pela HA+PSC100, sugereum equilíbrio entreas respostas imune Th1, Th2 eTh17, o qual poderia ser vantajoso na defesa contra a esporotricose. A formulação PetA+PSC100 induziu preferencialmente a produção de IgG2a,IL-12, IFN-γ eIL-4,evidenciando um balanço de resposta imune Th1/Th2. Os soros dos animais vacinados com HA+PSC100 e Pet+PSC100 foram capazes de inibir significativamente a adesão de S. schenckiia fibroblastos, de potencializar a fagocitose das leveduras por macrófagos obtidos desses animais e, ainda,de levar à diminuição das unidades formadoras de colônia do fungo no baço e fígado de animais previamente tratados com esses soros. Por fim, a formulação PetA+PSC100 apresentou uma toxicidade menor do que a HA+PSC100, demonstrada pela baixa citotoxicidade contra macrófagos in vitro e pela ausência de granulomas no tecido subcutâneo do local de inoculação. Nossos resultados ressaltam o potencial imunogênico das PSCs de S. schenckii quando formuladas com os adjuvantes HA eGel PetA,evidenciando o seu uso como alvo potencial para o desenvolvimento de uma vacina contra a esporotricose.

ABSTRACT:

Sporotrichosis is asubacute orchronicinfection affectinghumans andothermammals, caused bytheSporothrix schenckiispecies complex.Thediseasehas aworldwide distribution, but isconsidered endemicin Brazil, mainlyin the stateofRio deJaneiro,wherethe cathas become the maintransmittingagent.Theantifungal treatment is verylongand often associated to adverseeffects indicatingthedemand for preventiveormoreeffectiveandsafetherapeuticstrategies.One of the morepromissoryapproacheswould probablybethe prophylacticortherapeuticvaccination.This studyevaluated the immunogenicityand toxicityofcellsurfaceprotein-based (CSP) vaccinecandidates of S.schenckiistricto sensu.TheCSPsisolated with dithiotreitol werecharacterized byelectrophoresis, mass spectrometryand FungalRVadhesin predictor. TheCSPs wereformulated with two adjuvants,aluminumhydroxide (AH)orgel PetA,orused alone, in two concentrations.Theobtained formulations (CSP10, CSP100, AH+CSP10,AH+CSP100, PetA+CSP10andPetA+CSP100)wereadministeredto Balb/Cmicein twosubcutaneous doses at 2 weeks interval.Theserum obtained from each group 7 days after the second dosewas used to analyzethe immunogenicityof each formulation.All theserum obtained from vaccinated groups,except those from CSP10 and AH+CSP10 groups,reacted with a47 kDaband,previouslyidentified as the glycolyticenolaseenzymeand predicted as an adhesin in the FungalRV program.Subsequently, wedemonstrated thepresencethis proteinin thecellwallof S. schenckii, suggesting its immunogenicrole. Theinduction ofIgG and IgG2aimmunoglobulins was significantlyhigher with AH+CSP100and PetA+CSP100formulations with respect to CSP10, CSP100, AH+CSP10, andPetA+CSP10.Thesignificant induction ofIgG1 andIgG2asubtypes and IL-12, IFN-γ, IL-4and IL-17 byAH+CSP100, suggestsabalancein the immuneresponse Th1 /Th2 /Th17, which could beadvantageous forprotectingagainstsporotrichosis.Theformulation PetA+CSP100, preferablyinducedtheproduction ofIgG2a, IL-12,IFN-γandIL-4,evidencingaTh1/Th2response profile.Theseraofvaccinatedanimalswith AH+CSP100and PetA+CSP100 werefoundto significantlyinhibitthe adherenceofS. schenckiito fibroblasts, to potentizeyeast phagocytosis bymacrophages obtained from theseanimals,and todecreasecolonyforming units ofthe fungus into spleen and liver ofanimalspreviouslytreated with thesesera. Finally, ThePetA+CSP100 formulation showed lower toxicitythan AH+CSP100, as demonstrated bylow invitro cytotoxicityagainstmacrophages and lack ofgranulomas in the subcutaneous tissue oftheinoculation site. Ourresults emphasizethe immunogenicpotential ofS. schenckiiCSPs whenformulated withboth AHand PetA adjuvants, indicatingtheir useas potential target for thedevelopment ofa vaccine against sporotrichosis.


BANCA EXAMINADORA:

Membros Titulares:

IRACILDA ZEPPONE CARLOS (Orientadora)

FANNY GUZMÁN QUIMBAYO

SANDRO ANTONIO PEREIRA

LUCIANA SIMON PEREIRA CROTT

ANGELA MARIA VICTORIANO DE CAMPOS SOARES


Membros Suplentes:

SILVIO LUIS DE OLIVEIRA

ISABELLA DIB FERREIRA GREMIÃO

ANA MARISA FUSCO ALMEIDA


BIBLIOTECA DEPOSITÁRIA:

Biblioteca da Faculdade de Ciências Farmacêuticas de Araraquara-UNESP



Rodovia Araraquara-Jaú, km 1 – Araraquara-SP



©livred.info 2017
enviar mensagem

    Página principal